Beschreibung:

Mit Hilfe der Peptidkartierung können subtile Veränderungen der primären Struktur eines Proteins oder Antikörpers erkannt werden, die die Aktivität des Proteins oder die Bindungsaffinität beeinflussen können.Die Peptidkartierung durch LC-MS/MS ist eine der wirksamsten qualitativen Analysen zur Bestätigung der Primärsequenz von Proteinen oder Antikörpern.Dieser Dienst kann verwendet werden, um verschiedene Partien derselben Proteine, Antikörper oder Biosimilars zu vergleichen.

Dienstleistung der Peptidkartierungsanalyse durch LC-MS/MS umfasst:

• Der untersuchte Antikörper/Protein wird mit einem proteolytischen Enzym wie LysC oder Trypsin denaturiert, reduziert und verdaut.
• Optional: Ein zweites proteolytisches Enzym wird verwendet, um die Sequenzdeckung des Proteins zu erhöhen.
• Die entstehenden Peptidgemische werden auf einer HPLC mit umgekehrter Phase getrennt. Der Chromatograph der UV-Absorbanz wird bei UV 214 nm erstellt.
• Nach der HPLC-Trennung wird eine weitere Analyse mit einer hochauflösenden Massenspektrometrie (Thermo Fisher Orbitrap Velos oder Fusion) durchgeführt.
• Eine Peptidkarte des Proteins wird zum Vergleich mit einem Referenzprotein erstellt.
• Die Spitzen werden zur Primärsequenz analysiert.
• Optional (zwei oder mehr Proben): Eine Vergleichbarkeitsbeurteilung wird durchgeführt, um die Variation von Los zu Los zwischen Proteinen zu beurteilen oder Biosimilars zu vergleichen.

Zu lieferende Informationen:

• Bestätigung der Primärsequenzen (Sequenzdeckung: 60-90% unter Verwendung eines Enzyms; > 98% unter Verwendung von zwei oder mehr Enzymen).
• Glycoprofilierung von N-gebundenen Oligosacchariden (Heterogenität der Glykopharmen und Annäherung der Belegung der Stelle).
• Identifizierung und ungefähre Quantifizierung von PTM wie Deamidation, Oxidation,N-termische Pyroglutamatbildung und C-termische Lys-Verarbeitung (modifizierte Aminosäurestellung und %-Veränderung können nachgewiesen werden).
• Bewertung der Ähnlichkeit zwischen verschiedenen Partien.
• Bewertung der Vergleichbarkeit von Biosimilars.

Probenbehandlung: Denaturierung, Reduktion/Alkylierung und enzymatische Verdauung, gefolgt von LC-MS oder LC-MS/MS.