Ausführliche Einleitung

Um die beste Wirkung bei der Produktion von Antikörpern zu erzielen, ist es notwendig, das Antigen-Polypeptid sorgfältig zu konstruieren, und die Konstruktion sollte einer Grundbedingung entsprechen:Das Antigen wird keine übermäßige Immunantwort hervorrufen., und gleichzeitig kann es produzieren erzeugen Antikörper, die an das interessierte Protein binden.

Es wird im Allgemeinen empfohlen, dass die Sequenzlänge des antigenen Polypeptids zwischen 8 und 20 Aminosäureresiduen liegt.Es besteht die Gefahr, dass die Spezifität des Polypeptids nicht stark ist und die Bindungsfähigkeit zwischen dem erzeugten Antikörper und dem nativen Protein nicht stark genug ist.Wenn jedoch die Sequenzlänge 20 übersteigt, kann eine Sekundärstruktur eingeführt werden, und der entstehende Antikörper kann seine Spezifität verlieren, und je länger die Peptidkette, desto stärker ist die Spezifität des Antikörpers.je schwieriger die Synthese istMit jahrelanger Erfahrung in der Synthese schwieriger Peptide,KS-V Peptide kann effizient und schnell hochreine fertige Antigenpeptide zur Unterstützung Ihrer Forschung und Entwicklung liefern.

Anwendungen

Obwohl die meisten kurzen, linearen Peptidfragmente von Proteinen in wässriger Lösung unstrukturiert sind,Es wurde gezeigt, dass eine Reihe von immunogenen und antigenen Peptiden eine Konformationspräferenz für strukturierte Formen aufweisen.Durch den Einsatz von NMR und CD-Spektroskopie konnten relativ kleine Populationen von Beta-Turn-, Helical- und spiralförmigen Konformationen nachgewiesen und quantifiziert werden.In jüngster Zeit wurden Studien veröffentlicht, die darauf hinweisen, dass das Vorhandensein strukturierter Formen mit der Lage von T-Zell- und/oder B-Zell-Epitopen in Peptidsequenzen korreliert.Die Röntgenkristallstrukturen von Komplexen zwischen Peptiden und Antipeptid-Antikörpern zeigen häufig, daß die Peptide in Beta-Turn-Konformationen gebunden sind.und das Vorhandensein von Helix in einem Peptid-Antikörper-Komplex wurde durch NMR-Spektroskopie gezeigt. Studies of peptides free in solution and bound to anti-peptide antibodies in the crystal indicate that the structure of the principal neutralizing determinant of HIV-1 probably includes at least one beta-turn in a highly conserved regionDiese Ergebnisse können möglicherweise bei der Entwicklung von Peptid-basierten Impfstoffen verwendet werden.

Vorteile der Anwendung von Peptidantigenen

Zunächst einmal bieten Peptidantigene eine intelligente Lösung für die Antikörpergenerierung in Fällen, in denen die Aminosäuresequenz des Zielproteins bekannt ist, aber das Protein selbst nicht verfügbar ist.oder strukturell zu komplex, um als strukturell stabiles und intaktes Protein (e.g. bestimmte Transmembranrezeptoren, Ionenkanäle usw.).Der Peptid-Immunogen-Ansatz bietet als zusätzlichen Vorteil Flexibilität bei der Auswahl und Gestaltung von Antigenen für Domänen des Zielproteins.Peptidantigene sind auch sehr nützlich für die Erzeugung von Antikörpern gegen post-translational modifizierte Bindungsstellen an Zielproteinen.

Weitere Vorteile sind:

• Das Epitop ist von Anfang an gut definiert.
• Die Proteinsequenz ist alles, was wir brauchen.
• eine viel geringere Chance auf Kreuzreaktivität
• das Antigen ist vollständig synthetisch, was kostengünstig ist und in der Regel sehr kurze Lieferzeiten beinhaltet.

Konstruktionsstrategien für Peptidantigene

Obwohl viele Peptidsequenzen immunogen sein können, sind nicht alle gleich wirksam bei der Erzeugung von Antikörpern mit Reaktivität gegen das Zielprotein.Die erfolgreiche Erzeugung von Antikörpern mit Peptidantigen hängt von mehreren Faktoren ab, die bei der Konzeption berücksichtigt werden müssen., einschließlich:

die Genauigkeit der Aminosäuresequenz des Zielproteins
die vorhergesagte 2 / 3Airy-Struktur des intakten Proteins
Auswahl der Domänen/Regionen des Proteins, die vom Peptidantigen nachgeahmt werden sollen
die Notwendigkeit der Konjugation von Peptidantigen zu einem größeren Trägerprotein
die einfache Synthese bestimmter Peptidsequenzen
Daher gelten für die Konzeption von Peptidantigen folgende allgemeine Empfehlungen:

Stellen Sie sicher, dass die richtige Art und die richtige Proteinsequenz identifiziert wurden.
Das Peptidantigen wird aus einer lösungsmittelfreundlichen Region des nativen Proteins ausgewählt.Dies sind an der Proteinoberfläche freiliegende Bereiche, die mit der wässrigen (hydrophilen) Umgebung des Lösungsmittels in Berührung kommen.Bestimmte Bereiche des Proteins können für Antikörper unzugänglich sein, z. B. transmembranen Regionen oder das Zentrum eines globulären Proteins.

Ein wichtiger Vorteil besteht darin, dass Peptidantigene so konzipiert werden können, dass sie ein spezifisches Epitop abdecken.Bestimmte Domänen können auch in anderen Proteinen vorliegen: Diese Sequenzen sollten vermieden werden, um die Wahrscheinlichkeit einer unerwünschten Kreuzreaktivität zu minimieren und so die allgemeine Antikörperspezifität zu optimieren.Sequenzen mit minimaler Sequenzhomologie werden am besten ausgewählt, um die unerwünschte Bindung an Nichtzielproteine zu reduzieren..

Abhängig von der 3D-Struktur der Zieldomäne im intakten Protein können Einschränkungstechniken erforderlich sein, um die tertiäre Struktur des Antigens optimal nachzuahmen.Als einer der Spezialisten für Proteinoberflächenmimikrie, KS-V verfügt über verschiedene (teilweise proprietäre) Technologien für die Konstruktion und Synthese konformationsbeschränkter Peptidantigene.

Gener sind oft zu klein, um eine signifikante Immunantwort ohne vorherige Konjugation zu einem Trägerprotein wie KLH, BSA oder OVA zu erzeugen.Daher wird in der Regel die Verwendung von Peptid-?? Trägerproteinkonjugaten empfohlen..

Synthese von Peptidantigenen

Bei der Konzeption der Peptidantigene sollte auch die Leichtigkeit der Synthese spezifischer Peptidsequenzen berücksichtigt werden.und es ist für das Peptid günstig, Aminosäuren zu enthalten, die die Immunogenität fördern (z. B. Grund- und Aromaminosäuren)Der Gehalt an hydrophoben Aminosäuren sollte am besten unter 50% gehalten werden, und es sollte vorzugsweise auch lange Ketten von hydrophoben Rückständen vermieden werden.mindestens ein geladenes Rückstand (Arginin), Glutamin, Asparaginsäure oder Lysin) sollte in alle fünf Aminosäuren enthalten sein.Die Peptidlöslichkeit kann auch durch konservativen Ersatz oder Hinzufügung von polaren Rückständen an den N- oder C-Endpunkten verbessert werden.Bei der Konstruktion der Antigene sollten vorzugsweise komplexe Regionen wie Beta-Blätter oder Alpha-Helixen vermieden, sondern stattdessen flexible Regionen angestrebt werden.

KS-V wendet seine modernsten Fähigkeiten und Fachkenntnisse für die Synthese von Peptidantigen an, einschließlich (falls erforderlich) Konformationsbeschränkungen, PTM-V, Konjugation oder Biotinylierung.Für die meisten Projekte zur Erzeugung von Antikörpern wird für jedes Peptidantigen eine Reinheit von mindestens 85% empfohlen.Wir synthetisieren in der Regel etwa 10 mg Peptid, was normalerweise ausreicht für die Proteinkonjugation, und wir können auch Antigene mit höherer Reinheit liefern.ELISA-Screening und gegebenenfalls Konstruktion einer Affinitätsmatrixchromatographie.